CRISPR-dCas9实验流程

实验步骤 ：  

1.设计sgRNA

  按照“20N+NGG(PAM)”的设计原理设计sgRNA，至少设计3条。

2.构建sgRNA和dCas9-target 质粒

3.构建dCas9-target稳转株

  稳转株蛋白构建完成后，用flag抗体或目的蛋白抗体检测稳转株是否构建成功，如果载体上有荧光蛋白，可用荧光检测细胞株是否构建成功。

图3 荧光检测图片  A转染筛选后明场图片   B转染筛选后荧光图片 C未转染加嘌呤筛选细胞

4.Flag-ChIP-QPCR验证sgRNA的工作效率

  将sgRNA转染至dCas9-target稳转株中，ChIP检测sgRNA的工作效率。

• 1 . CRISPR-Cas9系统
  • 1.1. CRISPR-Cas9组成
  • 1.2. 作用机制
  • 1.3. 不同的Cas9系统
  • 1.4. Cas9-基因敲除
  • 1.5. Cas9-敲入系统
• 2 . CRSPER- dCas9系统
  • 2.1. dCas9-转录调控系统
  • 2.2. dCas9-基因激活与抑制系统
  • 2.3. dcas9-表观遗传系统
• 3 . dCas9技术路线
  • 3.1. gRNA设计
  • 3.2. dCas9实验流程
  • 3.3. 实验问题与解决方案